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实时荧光定量PCR方法应用于药品无菌快速检测的研究
荧光定量PCR 叠氮溴化丙锭 细菌污染 快速检测
2014/2/25
建立应用实时荧光定量PCR进行无菌快速检测的方法。方法 选取金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌,用裂解试剂盒抽提细菌基因组DNA,进行实时荧光定量PCR检测,并应用叠氮溴化丙锭(PMA)抑制样品中死菌基因组DNA的PCR扩增。结果 PMA能有效去除样品中死菌干扰,针对16S rRNA基因保守序列进行扩增的荧光定量PCR方法具有较高的灵敏度。在金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌检测中,最低含菌量组与阴性对照组Ct...
Sequence Analysis of Lysozyme C from the Scorpion Mesobuthus Eupeus Venom Glands Using Semi- Nested RT-PCR
C-type lysozyme Scorpion Mesobuthus eupeus Antimicrobial protein
2015/9/24
Background: Lysozyme is an antimicrobial protein widely distributed among eukaryotes and prokaryotes and take part in protecting microbial infection. Here, we amplified cDNA of MesoLys-C, a c-type lys...
对金钱白花蛇及其伪、混品药材和原动物的Cyt b基因片段的序列分析发现,该基因片段在金钱白花蛇及其伪品间的差异远远大于金钱白花蛇种内个体间的差异,是理想的用于鉴别金钱白花蛇及其伪混品的分子遗传标记。在对Cyt b基因片段序列分析的基础上,设计了金钱白花蛇PCR鉴别的一对高度特异性引物BuL-1和BuH-1。结果表明,该对引物在对金钱白花蛇的PCR鉴别中,用60℃~65℃的复性温度,可以100%检出...
HIV-1逆转录过程及应用PCR检测
HIV-1 逆转录 聚合酶链反应
2009/11/25
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)作为逆转录病毒,在进入宿主细胞以后其正链RNA基因组就在逆转录酶的作用下开始逆转录合成双链的DNA。HIV-1逆转录的过程大致包括以下几个步骤:负链强力终止DNA的起始合成,负链强力终止DNA的链转移,正链DNA的合成起始,正链强力终止DNA的链转移和最终完整双链DNA的合成。逆转录是HIV-1复制的重要环节,现已...
猪基源的肝素粗品及混淆品的AS-PCR及ARMS分子检测
猪基源肝素钠 mtDNA D-loop区 AS-PCR ARMS 分子鉴别
2009/11/20
本文建立了一种简便、准确的鉴别猪基源的肝素粗品及其混淆品的DNA分子鉴定方法。在对家猪、野猪及其他7种动物(均用于加工猪肝素粗品的混淆品)的mtDNA D-loop区进行序列分析的基础上,设计了专门用于鉴别猪基源肝素钠的AS-PCR(allele-specific PCR)引物及ARMS(amplification refractory mutation system)引物,对家猪、野猪及其他7种...
短片段引物PCR液相杂交法的建立及检测HBVYMDD的变异的研究
乙肝病毒 YMDD基因 基因扩增 聚合酶链反应
2008/11/18
项目基本内容:探讨乙肝病毒P基因C区变异位点,直接检测拉米夫啶治疗过程中与乙肝病毒耐药有关突变的产生,起着用药监测的重要意义。根据正常的基因序列设计一种可以分辨正常和突变密码子的上下游引物对,将HBV多聚酶基因序列中包括YMDD基因在内的一段65BP长度的DNA片段进行扩增,便可扩增出特异的PCR产物及YI(V)DD突变基因。短片段引物的延伸,每次只须合成40个碱基,减少了PCR反应液中各成分的消...
探讨分子生物学方法在临床标本结核分枝杆菌利福平耐药性评估中的应用价值。运用聚合酶反应-单链构象多态分析银染方法检测了36株结核杆菌分离株,对部分菌株做了DNA序列分析。结果显示特异性100%,阳性占94.4%,银染PCR-SSCP法具有简便、快速,准确的特点,提高敏感性,可对利福平耐药突变进行鉴定是关键。
复合PCR试剂盒研制--HPV、HCMV、CT的同时检测
PCR病毒检测 聚合酶链反应 医学检测 诊断试剂盒
2008/11/5
该成果的创新之处在于利用PCR技术的基本原理,通过优化PCR反应条件,使三种不同病原体的引物能在同一反应体系中同时扩增三个目的DNA片段,可检测临床标本存在HPV、CMV、CT的单独或混合感染,其敏感性、特异性不受影响,为临床提供一种快速、敏感、特异、经济的检测手段。国内外未见相同的文献报道。
采用酶固定化和酶稳定技术,解决了酶在4℃条件下不能稳定保存的国际难题;采用热启动技术,解决了PCR技术应用于临床检测中存在的特异性问题;采用组份隔离技术,解决了反应混合物中组份的干扰带来的不稳定性,采用了特异性大分子共价交联技术,解决了微孔板探针交联的稳定性问题;利用基因工程前沿技术,克隆表达了尿苷葡萄糖基酶,解决了U-DNA的酶解问题,实现了高灵敏度检测和防止扩增污染的双赢效应。
产品功能及应用领域:该产品可以准确检测沙眼衣原体基因,检测的灵敏度可达0.5fg的沙眼衣原体基因。该产品用于临床非淋球菌性尿道炎的实验室诊断。技术特点:该产品根据中国人沙眼衣原体的流行病学特点自行研制了适合中国人使用的沙眼衣原体特异性引物、探针。独创增强剂、微囊酶等技术。与国内外同类产品比较:该产品在国家药品监督局组织临床考核中产品为国内同类产品第一,产品可与国际著名公司雅培公司的LCR相比美。项...
背景与目的:建立一种灵敏、快速、无放射性污染的生物方法来检测环境样本中的二恶英类化合物。材料与方法:二恶英类化合物可以活化胞浆内芳香烃受体(AhR)使之与一段包含特定序列的双链DNA结合,结合的DNA 因受蛋白质保护可抵抗核酸外切酶消化而保留下来,痕量的保留DNA通过PCR检测出来。根据此原理本研究将TCDD溶液加入到含AhR及相关蛋白的细胞溶质中,在体外与含二恶英反应元件的DNA作用形成二恶英-...
荧光PCR检测试剂及配套设备
基因诊断 聚合酶链反应 生化试剂 诊断试剂盒
2008/9/1
产品功能及应用;荧光RCR检测试剂盒四种(沙眼衣原体、结核杆菌、乙型肝炎病、丙型肝炎病毒),配套检测设备三种(荧光基因分析仪、基因扩增仪、高速离心机),应用领域:临床实验室诊断,优生优良,流行病学研究,健康检查。技术特点:PCR试剂独创研发新型荧光探针标记技术、Taq酶微囊化及增强剂技术。配套设备应用先进的PC控制系统,高灵敏度、高精度的元件。与国内外同类产品比较:PCR试剂单管单人份预分装;结果...